De standaard initiële screening in gekweekte huidfibroblasten voor een peroxisomale ziekte omvat:
1) onderzoek naar de aan-/afwezigheid en de morfologie van peroxisomen met behulp van catalase immunofluorescentie;
2)zeer lang-keten vetzuuranalyse, en
3) DHAPAT activiteitsbepaling (DHAPAT, dihydroxyacetonfosfaat-acyltransferase, het eerste enzym uit de plasmalogeen biosyntheseroute). De resultaten van deze analyses laten zien of de patiënt een peroxisoom biogenese defect heeft of een geïsoleerde peroxisomale β-oxidatie deficiëntie. Aanvullende analyses kunnen worden uitgevoerd, zoals peroxisomale alfa- of beta-oxidatie activiteitsmeting of meting van de activiteit van één bepaald enzym (bv acyl-CoA oxidase 1, D-bifunctional protein, Sterol carrier protein X).
Materiaal:
Gekweekte huidfibroblasten
- Bewaren/verzenden: Kamertemperatuur.
- Instructie: Laat de fibroblasten groeien tot ~80% confluentie in een T-25 kweekfles. Vul voor versturing het kweekflesje volledig met steriel gebufferd (m.b.v. 25 mM Hepes) kweekmedium (bv. HAM of DMEM) aangevuld met 10% serum en 1% penicilline-streptomycine. Sluit het kweekflesje goed en omwikkel de dop met parafilm. Label de kweekfles eenduidig met naam van de patiënt en geboortedatum. Verpak het flesje in beschermend materiaal en verstuur de fibroblasten bij kamertemperatuur. Het materiaal moet binnen 48 uur aankomen op het laboratorium Genetische Metabole Ziekten. Een volledig ingevuld aanvraagformulier moet worden meegestuurd met het patiëntenmateriaal.
Wanneer het niet mogelijk is fibroblasten in kweek te versturen, kan een huidbiopt in steriel gebuffered (m.b.v. 25 mM Hepes) kweekmedium (bv. HAM of DMEM) zonder toevoeging van serum of antibiotica worden verstuurd bij kamertemperatuur.
Voor interne aanvragers:
Bioptmedium kan worden afgehaald bij de balie van het laboratorium Genetische Metabole Ziekten (F0-132). - Doorlooptijd: 3 maanden.